ชุด PCR แบบเรียลไทม์ของไวรัส Monkeypox

1. ตัวอย่างของสะสม:ควรเก็บตัวอย่างใส่หลอดปลอดเชื้อตามที่กำหนด

ด้วยข้อกำหนดทางเทคนิคมาตรฐาน

2. การเตรียมรีเอเจนต์ (พื้นที่เตรียมรีเอเจนต์)

นำส่วนประกอบของชุดอุปกรณ์ออกมา ปรับสมดุลที่อุณหภูมิห้องเพื่อใช้งานในโหมดสแตนด์บาย

3. การประมวลผลตัวอย่าง (พื้นที่การประมวลผลตัวอย่าง)

3.1 การสกัดกรดนิวคลีอิก

ขอแนะนำให้เก็บตัวอย่างของเหลวขนาด 200μL แบบควบคุมเชิงบวกและแบบลบสำหรับการสกัดกรดนิวคลีอิก ตามข้อกำหนดและขั้นตอนที่เกี่ยวข้องของชุดสกัด DNA ของไวรัส

3.2 การละลายผงไลโอฟิไลซ์และการเติมเทมเพลต

เตรียมพรีมิกซ์ Monkeypox Virus Lyophilized ตามจำนวนตัวอย่างตัวอย่างหนึ่งรายการต้องใช้หลอด PCR หนึ่งหลอดที่มีผงพรีมิกซ์ไลโอฟิไลซ์การควบคุมเชิงลบและการควบคุมเชิงบวกควรถือเป็นสองตัวอย่าง

(1) เติมสารละลายละลาย 15μL ลงในหลอด PCR แต่ละหลอดที่มีพรีมิกซ์แบบ Lyophilized จากนั้นเติมตัวอย่างที่สกัดแล้ว 5μL/ การควบคุมเชิงลบ/การควบคุมเชิงบวก ลงในหลอด PCR แต่ละหลอดตามลำดับ

(2) ปิดหลอด PCR ให้แน่น สะบัดหลอด PCR ด้วยมือจนกระทั่งผงไลโอฟิไลซ์ละลายและผสมจนหมด เก็บของเหลวไว้ที่ด้านล่างของหลอด PCR โดยการปั่นแยกด้วยความเร็วต่ำทันที

(3) หากใช้เครื่องมือ PCR แบบเรียลไทม์ทั่วไปในการตรวจจับ ให้ย้ายหลอด PCR ไปยังพื้นที่ขยายโดยตรงหากใช้ BTK-8 ในการตรวจจับ จะต้องดำเนินการต่อไปนี้: ถ่ายโอนของเหลว 10 μL จากหลอด PCR ไปยังชิปปฏิกิริยาของ BTK-8ท่อ PCR หนึ่งท่อตรงกับหนึ่งช่องบนชิปในระหว่างการดำเนินการปิเปต ตรวจสอบให้แน่ใจว่าปิเปตอยู่ในแนวตั้ง 90 องศาควรวางทิปปิเปตกั้นละอองลอยไว้ตรงกลางบ่อโดยใช้แรงปานกลาง และหยุดดันปิเปตเมื่อถึงเกียร์แรก (เพื่อหลีกเลี่ยงฟองอากาศ)หลังจากเติมหลุมแล้ว ให้นำเมมเบรนชิปปฏิกิริยาออกมาเพื่อครอบคลุมหลุมทั้งหมด จากนั้นชิปจะถูกถ่ายโอนไปยังพื้นที่ตรวจจับการขยายสัญญาณ

4. การขยาย PCR (พื้นที่การตรวจจับ)

4.1 ใส่ท่อ PCR/ชิปปฏิกิริยาลงในถังปฏิกิริยา และตั้งชื่อของแต่ละปฏิกิริยาตามลำดับที่สอดคล้องกัน

4.2 การตั้งค่าการตรวจจับเรืองแสง: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) การควบคุมภายใน (CY5)

4.3 เรียกใช้โปรโตคอลการขี่จักรยานต่อไปนี้

โปรโตคอลของ ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 พิธีสารของ BTK-8:

5. การวิเคราะห์ผลลัพธ์ (โปรดดูคู่มือผู้ใช้เครื่องมือ)

หลังจากปฏิกิริยา ผลลัพธ์จะถูกบันทึกโดยอัตโนมัติคลิก "วิเคราะห์" เพื่อวิเคราะห์ จากนั้นเครื่องมือจะตีความค่า Ct ของแต่ละตัวอย่างในคอลัมน์ผลลัพธ์โดยอัตโนมัติผลการควบคุมเชิงลบและบวกจะต้องเป็นไปตาม "6. การควบคุมคุณภาพ" ต่อไปนี้

6. ควบคุมคุณภาพ

6.1 การควบคุมเชิงลบ: ไม่มี Ct หรือ Ct>40 ในช่อง FAM, Ct≤40 ในช่อง CY5 พร้อมกราฟการขยายปกติ

6.2 การควบคุมเชิงบวก: Ct≤35 ในช่อง FAM พร้อมกราฟการขยายปกติ, Ct≤40 ในช่อง CY5 พร้อมกราฟการขยายปกติ

6.3 ผลลัพธ์จะถือว่าถูกต้องหากเป็นไปตามเกณฑ์ข้างต้นทั้งหมดมิฉะนั้นผลลัพธ์จะไม่ถูกต้อง

การตีความผลลัพธ์

ผลลัพธ์ต่อไปนี้เป็นไปได้:

บันทึก: หากผลลัพธ์ไม่ถูกต้อง จะต้องรวบรวมตัวอย่างและทดสอบอีกครั้ง